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        牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒CRISPR-Cas12a熒光法結(jié)合重組酶聚合酶擴(kuò)增法 (RPA)的敏感性和特異性檢測(cè)

        時(shí)間:2023-08-24   訪問量:1080


        牛結(jié)節(jié)性皮膚病(LSD)是由牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(LSDV)引起的一種烈性、傳染性病毒病。為對(duì)LSD進(jìn)行早期防控,本研究利用基于orf068基因的重組酶聚合酶擴(kuò)增法(RPA)結(jié)合基于CRISPR-Cas12a的熒光法(RPA-Cas12a熒光法),建立了一種新的LSDV現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,新建的RPA-Cas12a熒光法以質(zhì)粒為模板,靈敏度可達(dá)5 copies/μL,而傳統(tǒng)檢測(cè)方法以病毒基因組DNA為模板,靈敏度為102 TCID50/mL;該方法與其他常見牛病毒無(wú)交叉反應(yīng)。此外,對(duì)40份牛臨床樣本的現(xiàn)場(chǎng)RPA-Cas12a熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,診斷靈敏度為96.3%(95%CI:810~99.9%),特異性為92.31%(95%CI:62~109.6%),與定量PCR檢測(cè)結(jié)果相近。因此,本研究新建立的RPA-Cas12a熒光法在LSDV現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方面具有很好的應(yīng)用前景。


        原文鏈接:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35627121/










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