國家獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟國家獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟致力于建立獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)發(fā)展信息交流平臺，收集了解產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新過程中的需求，為聯(lián)盟成員單位提供技術(shù)、產(chǎn)品、人力資源、融資和信息、咨詢、培訓(xùn)等綜合服務(wù)；受企業(yè)委托，對科技成果的技術(shù)水平和產(chǎn)業(yè)化前景進(jìn)行評估；舉辦獸藥行業(yè)技術(shù)創(chuàng)新論壇，加強(qiáng)成員單位間的信息交流，提出切實(shí)建議，凝聚產(chǎn)業(yè)共識，積極為國家政策獻(xiàn)言獻(xiàn)策，引導(dǎo)行業(yè)健康發(fā)展。獸用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(VICH)指導(dǎo)原則轉(zhuǎn)化是補(bǔ)充我國獸藥技術(shù)指導(dǎo)原則的一種途徑。對VICH GL43在我國獸藥注冊中的適用性進(jìn)行研究，并與我國發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則技術(shù)要點(diǎn)進(jìn)行比較，分析和討論一般靶動物安全試驗(yàn)和其他情形靶動物安全性試驗(yàn)在動物選擇、研究設(shè)計、給藥方案、實(shí)驗(yàn)參數(shù)等方面的考慮和要求，并評估其適用性，為獸藥研發(fā)和技術(shù)評審相關(guān)人員提供參考。
技術(shù)指導(dǎo)原則是獸藥注冊技術(shù)評審體系的基石，是對某一知識領(lǐng)域基于當(dāng)前的認(rèn)知所達(dá)成的共識，是企業(yè)進(jìn)行新獸藥研發(fā)的技術(shù)指導(dǎo)文件，也是獸藥技術(shù)評審工作的參考文件。目前，我國獸藥注冊技術(shù)評審體系正在不斷建設(shè)和完善，隨著科學(xué)技術(shù)進(jìn)步、獸藥研發(fā)和評審需求，需要不斷制修訂技術(shù)指導(dǎo)原則。將國際指導(dǎo)原則進(jìn)行轉(zhuǎn)化研究并評估其適用性，是補(bǔ)充技術(shù)指導(dǎo)原則的一種途徑。獸用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(VeterinaryInter-nationalConferenceonHarmonization，VICH)指導(dǎo)原則是歐洲共同體(歐盟前身)、美國、日本三方對獸藥注冊技術(shù)要求取得的共識內(nèi)容，包括質(zhì)量控制、安全性和有效性技術(shù)指導(dǎo)原則。對VICH技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行轉(zhuǎn)化適用性研究，尤其是我國獸藥目前尚未制訂的技術(shù)指導(dǎo)原則，對于借鑒關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)、增強(qiáng)研發(fā)指導(dǎo)、統(tǒng)一評審尺度、促進(jìn)獸藥國際貿(mào)易均具有重要的意義。
獸用化學(xué)藥品靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則(VICH GL43)于2009年7月開始實(shí)施，我國與靶動物安全性相關(guān)的指導(dǎo)原則包括寵物用藥物靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則、蠶藥靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則、畜禽用藥物靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，與VICH指導(dǎo)原則有不同點(diǎn)。本文對VICH GL43在我國獸藥注冊中的使用適用性進(jìn)行研究，并與我國發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則技術(shù)要點(diǎn)進(jìn)行比較，分析和討論一般靶動物安全和特殊情形靶動物安全性試驗(yàn)在動物選擇、研究設(shè)計、給藥方案、實(shí)驗(yàn)參數(shù)等方面的考慮和要求，并評估各個項(xiàng)目的適用性，適用性采用描述性分析，適用的情形可以直接參考，部分適用的情形可以結(jié)合實(shí)際評估后使用，不適用的情形需要按照我國的相關(guān)規(guī)定實(shí)施。
VICH GL43要求：安全性研究需要符合GLP要求，受試制劑需要符合cGMP要求；我國指導(dǎo)原則要求：安全性研究需要符合獸藥GCP要求，受試制劑需要在符合GMP要求的車間生產(chǎn)，并提供獸藥檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報告，而我國獸藥GLP/GCP與VICH獸藥GLP/GCP劃分的維度有差異，我國是按靶動物維度劃分獸藥GCP，VICH是按照采用患病動物在田間條件實(shí)施臨床試驗(yàn)的維度劃分獸藥GCP。另外，GMP的管理也有細(xì)微差別。VICH GL43適用動物種屬為牛、綿羊、山羊、豬、馬、禽、犬、貓，少數(shù)動物和未包含的靶動物應(yīng)符合擬注冊國家/地區(qū)管理規(guī)定。我國靶動物相關(guān)的指導(dǎo)原則規(guī)定，畜禽用新原料藥制成的制劑可直接參考VICH GL43實(shí)施，犬貓用制劑、已有上市原料的禽畜用制劑、蠶用制劑我國有發(fā)布的具體指導(dǎo)原則，可以直接適用。另外，在評價有效性的田間試驗(yàn)也可以提供必要的靶動物安全性數(shù)據(jù)，我國相關(guān)的指導(dǎo)原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則、防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，這些也可以直接使用。因此，指導(dǎo)原則適用的動物種屬要求判定為部分適用。一般靶動物安全性試驗(yàn)要點(diǎn)的適用性一般靶動物安全性試驗(yàn)通常采用多倍的擬推薦劑量和/或多倍擬推薦療程來研究受試獸藥的靶動物安全性，識別毒性靶器官和量效關(guān)系，確定安全范圍，提示田間試驗(yàn)的潛在不良反應(yīng)，并為說明書中的安全警示和使用注意事項(xiàng)提供支撐數(shù)據(jù)。一般靶動物安全性試驗(yàn)要點(diǎn)的適用性見表1。
基本研究設(shè)計應(yīng)考慮推薦劑量(1X)、給藥時間、給藥途徑、溶劑和注射的最大體積，通常每組使用8只動物。應(yīng)包括與擬上市獸藥給藥體積相同的生理鹽水對照。如果擬上市獸藥非液體制劑，應(yīng)使用合適的陰性對照。應(yīng)特別注意每次注射的位置和時間，以便確定局部癥狀的緩解時間。注射部位研究安全性評價可以包括以下內(nèi)容：臨床體征，包括行為或運(yùn)動的變化；注射部位的外觀、炎癥、水腫或其他變化；檢測肌酸激酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平；適當(dāng)時間病變的大體病理學(xué)和組織病理學(xué)。如果注射部位存在炎癥，在目視或觸診發(fā)現(xiàn)炎癥在計劃研究結(jié)束時尚未緩解，則應(yīng)確定注射部位炎癥到臨床恢復(fù)所需的時間。如果注射部位臨床體征明顯，可能需要對病變的組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。注射部位的安全性評價內(nèi)容判定為適用，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)，可結(jié)合臨床試驗(yàn)實(shí)施。對于外用制劑應(yīng)按照標(biāo)簽擬定劑量評價局部不良反應(yīng)，一般每組8只動物，除非產(chǎn)品的藥理學(xué)和毒理學(xué)證明多倍劑量和/或持續(xù)時間是合理的。具有全身吸收的局部外用制劑，應(yīng)進(jìn)行一般靶動物安全研究。一般局部不良反應(yīng)應(yīng)該檢查用藥部位的腫脹、疼痛、發(fā)熱、紅斑等臨床體征。應(yīng)注意動物的運(yùn)動或行為變化。如果注射部位存在炎癥，目視或觸診發(fā)現(xiàn)炎癥在計劃研究結(jié)束時尚未緩解，則應(yīng)確定用藥部位炎癥到臨床恢復(fù)所需的時間。如果用藥部位臨床體征明顯，可能需要對病變的組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。皮膚外用制劑給藥部位安全性內(nèi)容判定為適用，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)，可結(jié)合臨床試驗(yàn)實(shí)施。擬用于種畜/種禽具有全身吸收的擬上市獸藥，應(yīng)進(jìn)行生殖安全性研究，旨在確定擬上市獸藥對雄性或雌性繁殖或后代生存力的不良影響。試驗(yàn)參數(shù)通常集中于生殖變量，除非藥理毒理學(xué)結(jié)果顯示該獸藥可能影響性成熟，否則不考慮產(chǎn)后期以后后代的生存力。應(yīng)選擇健康、性器官完整、生殖狀態(tài)良好的雄性和雌性動物，代表使用藥物的靶動物種屬、年齡和類別。一般每個給藥組納入每種性別8只動物，雄性和雌性可以在相同或不同的研究中進(jìn)行評價。通常，在至少一個生精周期給予雄性陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。在育種前(卵泡期直至妊娠)、整個妊娠期(包括胚胎期、胎兒期和出生期)以及在分娩適當(dāng)時間(包括產(chǎn)后期，足以評估后代的初期發(fā)育和運(yùn)動功能)，給予雌性動物陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。分娩時或分娩前后不需要給藥，除非在特別指明該獸藥在此時間使用。生殖安全性研究應(yīng)酌情評價以下內(nèi)容：雄性動物：精子發(fā)生、精液質(zhì)量和交配行為；雌性動物：發(fā)情周期、交配行為、妊娠率、妊娠時間、分娩和哺乳期；給藥雄性和/或雌性動物的后代：發(fā)育毒理學(xué)(包括致畸性、胎兒毒性)、胎兒發(fā)育、后代數(shù)、生存力和生長、健康和發(fā)育至斷奶；家禽：蛋重、殼厚、由雌禽產(chǎn)蛋數(shù)、蛋繁殖力、孵化率和雛禽生存力。奶牛乳房注入劑應(yīng)進(jìn)行乳腺安全性研究，所用奶牛應(yīng)無亞臨床或臨床乳腺炎，應(yīng)以每個乳頭給予一個劑量的方式進(jìn)行試驗(yàn)，采用標(biāo)簽擬定的使用條件、推薦劑量(1X)和給藥頻率。擬用于泌乳期的，應(yīng)評價藥物對早期至中期泌乳期奶牛的急性炎癥反應(yīng)，擬用于非泌乳期的，應(yīng)評價泌乳期急性炎癥反應(yīng)和非泌乳期慢性炎性反應(yīng)。首選單組自身對照設(shè)計評價每頭奶牛給藥前和給藥后參數(shù)變化，也可以比較給藥組與陰性對照，一般選擇8只泌乳期奶牛，包括4只初乳期奶牛。應(yīng)對所有研究動物進(jìn)行體檢，包括觸診，以確定腫脹、紅斑、疼痛或發(fā)熱。對于泌乳期動物的任何一種研究設(shè)計，應(yīng)該在給藥前、給藥期和給藥后采集與組織刺激和產(chǎn)乳量相關(guān)的所有相關(guān)變量數(shù)據(jù)。給藥后監(jiān)測期應(yīng)該根據(jù)參數(shù)值恢復(fù)到給藥前參數(shù)值的預(yù)期時間提前規(guī)定。應(yīng)在擠奶前采集每個奶頭樣品用于定量體細(xì)胞計數(shù)(SCC)和細(xì)菌培養(yǎng)。應(yīng)記錄每日產(chǎn)乳量、組成(例如脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖和非脂肪固體)和外觀。安全性評估的關(guān)鍵變量通常包括乳腺刺激、SCC升高和產(chǎn)乳量變化。不可接受給藥后SCC非常高或SCC延長，并需解釋。田間試驗(yàn)的靶動物安全性數(shù)據(jù)的適用性進(jìn)行田間試驗(yàn)時，應(yīng)同時觀察藥物的不良反應(yīng)。適用。我國發(fā)布相關(guān)指導(dǎo)原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥的靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則。從各部分適用性的分析結(jié)果來看，靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則(VICH GL43)的一般靶動物安全部分和特殊靶動物安全內(nèi)容均判定為適用，除了與管理相關(guān)的內(nèi)容存在差異。我國在制定相關(guān)指導(dǎo)原則時充分參考了VICH GL43的所有評價技術(shù)要點(diǎn)，并制定了集結(jié)國內(nèi)專家智慧的特殊指導(dǎo)原則，如蠶用制劑靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則、防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，這對我國還需要補(bǔ)充的指導(dǎo)原則提供了思路和借鑒。但是，VICH指導(dǎo)原則因?yàn)槭枪沧R內(nèi)容，結(jié)構(gòu)是框架式的，內(nèi)容還不夠詳細(xì)，比如，生殖安全性研究，沒有不同種畜/種禽雄性一個生精周期時間和雌性生殖時間的參考數(shù)據(jù)，例如，種禽給藥28天的試驗(yàn)設(shè)計，可以涵蓋公雞的一個生精周期(13天)、母雞一個發(fā)情周期(1天)、雞蛋形成期(12天)，這些可在轉(zhuǎn)化時進(jìn)行適當(dāng)補(bǔ)充。當(dāng)臨床評估獲益/風(fēng)險而實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)和田間數(shù)據(jù)無法滿足評估需要時，可以補(bǔ)充或擴(kuò)大靶動物安全試驗(yàn)內(nèi)容，比如探索毒性的可逆性。基于動物試驗(yàn)的“4R”原則，即減少(reduc?tion)、優(yōu)化(refinement)、替代(replacement)、責(zé)任 (Responsibility)，我國一般靶動物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則建議的動物數(shù)是每組至少6只動物，與VICHGL43的每組至少8只動物(見表1)略有差異。我國制定指導(dǎo)原則考慮的依據(jù)為靶動物安全性試驗(yàn)統(tǒng)計不需要采用“拒絕H0假設(shè)”的統(tǒng)計學(xué)方法，即不用必須求出P值，其統(tǒng)計學(xué)方法為描述性分析，比如動物數(shù)量、中位數(shù)、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、最大值、最小值、超出正常范圍的數(shù)量和百分比等。再者，在生殖安全性研究中，應(yīng)采用靶動物進(jìn)行試驗(yàn)。但有一種特例，即擬上市獸藥在靶動物與其他動物的藥動學(xué)特性沒有差異，則試驗(yàn)動物的生殖安全數(shù)據(jù)可以作為支持?jǐn)?shù)據(jù)，但說明書要標(biāo)明“未對靶動物進(jìn)行生殖安全性研究，在育種、妊娠或泌乳期動物或其后代中的安全性尚未確定”。指導(dǎo)原則不是強(qiáng)制性的法規(guī)文件，而是一種建議，VICH指導(dǎo)原則僅是共識內(nèi)容，因此，一個技術(shù)指導(dǎo)原則無法窮盡所有情形，試驗(yàn)設(shè)計需要結(jié)合藥物特點(diǎn)、擬用的靶動物特點(diǎn)、適應(yīng)證等等進(jìn)行具體問題具體分析，用于具體的少見動物和少見適應(yīng)證藥物可能需要單獨(dú)制定相關(guān)指導(dǎo)原則。鑒于前述分析，VICH GL43在我國獸藥化學(xué)藥品研發(fā)和注冊時參考使用是適用的。
基金項(xiàng)目： 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所獸藥行業(yè)公益性重點(diǎn)專項(xiàng)“獸用化學(xué)藥品注冊法規(guī)與指導(dǎo)原則研究”（GY202106） 之課題 “ 獸用化學(xué)藥品VICH 指導(dǎo)原則適用性研究”作者簡介：李 丹，碩士，副研究員，從事獸藥注冊評審評價方面工作。
通訊作者：蘇富琴 。E-mail：qinqinsu123@163.com
作者單位：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
文章節(jié)選自中國獸藥雜志2023年7月第57卷第7期《VICH GL43 指導(dǎo)原則適用性研究》
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